TurboID
▲ TurboID鄰近標記技術(shù)原理圖
TurboID鄰近標記技術(shù)原理簡介 TurboID是一種新的生物素連接酶，它可以將生物素轉(zhuǎn)化為一種共價標記近端蛋白質(zhì)的反應性中間體，進而將鄰近的蛋白質(zhì)標記上生物素。與BioID使用的生物素連接酶相比，TurboID的催化活性得到大大提升(標記時間從18 hrs縮短至10 min），從而大大的提高了標記效率。
TurboID鄰近標記(Proximity labeling, PL)的原理是將TurboID生物素連接酶與誘餌蛋白融合，當誘餌蛋白與靶標蛋白發(fā)生互作時，TurboID生物素連接酶通過催化的共價修飾將鄰近的蛋白標記上生物素，最后通過親和素磁珠富集生物素標記的蛋白進行質(zhì)譜鑒定，從而獲得靶標蛋白信息。蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interactions, PPIs)是細胞生命活動的基礎。傳統(tǒng)的體內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用捕獲技術(shù)如親和純化-質(zhì)譜技術(shù)(AP-MS)，不能有效地捕獲瞬時的或較弱的蛋白相互作用，也不適用于低豐度的蛋白或疏水性較強的膜蛋白，且無法分辨蛋白相互作用發(fā)生的細胞區(qū)室化信息，存在較多的限制。然而，許多重要的信號轉(zhuǎn)導蛋白如受體激酶以及細胞譜系發(fā)生的驅(qū)動因子往往具有上述特征，這很大地限制了我們對于細胞活動精細調(diào)控過程的認識。
TurboID鄰近標記技術(shù)就可以克服以上的一些難題，在研究低豐度蛋白的互作蛋白組以及稀有、瞬時細胞類型的細胞、亞細胞蛋白組方面相比傳統(tǒng)AP-MS都有明顯的優(yōu)勢。
傳統(tǒng)IP-MS和酵母雙雜交技術(shù)的弊端：
①酵母屬于低等的真核生物，相比高等生物而言，其互作關(guān)系與真實的體內(nèi)互作關(guān)系相差較大；
②不能有效地捕獲瞬時的或較弱的蛋白相互作用；
③不適用于低豐度的蛋白或疏水性較強的膜蛋白；
④酵母體系依賴高質(zhì)量的cDNA文庫，而且假陽性較高；
TurboID鄰近標記技術(shù)技術(shù)優(yōu)勢 ①可以捕獲瞬時的或較弱的蛋白相互作用；
②適用于低豐度的蛋白或疏水性較強的膜蛋白的互作；
③在目標生物體內(nèi)獲得的互作情況可信度高，假陽性低；
④可以在佳的生理狀態(tài)下獲得的靶標蛋白的信息；
⑤即使瞬時互作的蛋白發(fā)生了轉(zhuǎn)移，但由于靶標蛋白仍保留了生物素化的特征，也能通過TurboID鄰近標記技術(shù)識別檢測，不被細胞區(qū)室化所影響。
TurboID鄰近標記技術(shù)服務范疇 ①研究蛋白與蛋白的相互作用；
②尋找目標激酶或者激酶的底物，用于瞬時互作或者弱互作蛋白的篩選；
③用于低豐度的蛋白或疏水性較強的膜蛋白的篩選；
④揭示目的蛋白在體內(nèi)的互作景觀；
TurboID鄰近標記技術(shù)服務周期 根據(jù)基因、細胞特性以及服務目的的不同，服務周期在4~6周。
服務流程 合同簽訂>預付款支付>提供靶細胞或者植物（我司現(xiàn)有的不需要提供）>項目啟動>實驗開展（定期匯報進度）>實驗結(jié)束>支付尾款，完成項目交付。
服務優(yōu)勢 ①團隊經(jīng)驗豐富；
②密切跟進實驗進展，積極主動匯報進展；
③根據(jù)客戶需求提供客戶項目的相關(guān)數(shù)據(jù)以及分析的結(jié)果；
④提供實驗詳細記錄，確保實驗數(shù)據(jù)真實可靠。
